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細胞水平實驗
細胞水平實驗
  • 細胞水平實驗

細胞水平實驗

產品報價:詢價

更新時間:2020/7/13 11:41:11

地:廣東

牌:廣州競遠

號:Y-L13

廠商性質: 服務型,

公司名稱: 廣州競遠生物科技有限公司

產品關鍵詞: 細胞遷徙與侵襲服務   免疫熒光檢測   原代細胞分離與鑒定   流式分析服務   細胞水平實驗  

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向遠 : (18028560893) (020-84131654)

(聯系我時,請說明是在來寶網上看到的,謝謝?。?/b>


流式分析服務
流式細胞術工作原理是在細胞分子水平上通過單克隆抗體對單個細胞或其他生物粒子進行多參數、快速的定量分析。它可以高速分析上萬個細胞,并能同時從一個細胞中測得多個參數,具有速度快、精度高、準確性好的優點,是當代最先進的細胞定量分析技術之光源、液流通路、信號檢測傳輸和數據的分析系統是流式細胞儀的主要組成。目前臨床中運用流式細胞儀進行外周血白細胞、骨髓細胞以及腫瘤細胞等的檢測是臨床檢測的重要組成部分。

 

應用
應用十分廣泛,常見的有細胞周期、細胞凋亡、細胞表面因子染色、胞內因子染色、線粒體膜電位染色、ROS檢測、細胞分選等。

送樣要求
1.細胞
(1)細胞周期檢測
a.細胞沒固定:不含EDTA的胰酶消化細胞,終止后,離心去掉含胰酶的上清,PBS洗滌1-2次,用無血清培養基重懸細胞,常溫送樣。
b.細胞已進行固定:請標明是否固定過夜,固定的細胞需要4°C送樣。
c.細胞懸液或貼壁細胞:每份樣本至少1×106個細胞.

 

(2)細胞凋亡檢測
a.已染色的樣本:請標明染色的熒光標記,標記好的樣本請避光,4°C
b.未標記的樣本:
①不含EDTA的胰酶消化細胞,終止后,離心去掉含胰酶的上清,PBS洗滌1-2次,用無血清培養基重懸細胞,常溫或4°C送樣
②不做任何處理,將培養好的細胞,按原來的培養皿/板或培養瓶直接送樣。將原來的培養上清吸出放在一離心管中,標明樣本標號,原孔添加新的不含血清培養基,覆蓋細胞表面,常溫或4C運送。
C.細胞懸液或貼壁細胞:每份樣本至少1×106個細胞
 
(3)細胞表面/胞內抗原檢測
a.樣本處理:
①不含EDTA的胰酶消化細胞,終止后,離心去掉含胰酶的上清,PBS洗滌1-2次,用無血清培養基重懸細胞,4°C送樣。
②不做任何處理,將培養好的細胞,按原來的培養皿/板或培養瓶直接送樣,4°C運送。
b.細胞懸液或貼壁細胞:每份樣本至少1×106個細胞。
C.客戶需提供一抗抗體或由我司代購:請標注抗體的種屬,公司和貨號等抗體詳細信息。

(4)細胞陽性?檢測
a.必須提供一份不含任何芡光的空白參照,標明樣本所攜帶的芡光標記,特殊標記請標明激發光和發射光的波長。
b.細胞懸液或貼壁細胞:每份樣本至少1×106個細胞。
c.抗體:請標注抗體的種屬,公司和貨號等抗體詳細信息。
 
2.血液樣本
a.請標注血液樣本是否攜帶傳染性,使用抗凝管儲存,常溫或4.C運送。
b.抗體:請標注抗體的種屬,公司和貨號等抗體詳細信息。
 
3.組織
a.需浸泡在無菌的生理鹽水或PBS中,無菌保存于4.C,并標記樣本名稱以及種屬,注意:如果樣本為非正常種屬的,請標明是否攜帶傳染性。
b.抗體:請標注抗體的種屬,公司和貨號等抗體詳細信息。

應用
檢測異倍體的腫瘤細胞,檢測藥物,基因或蛋白等對細胞周期的影響。

 

2、 Annexin V/PII雙染法

 

細胞凋亡研究不僅受到基礎醫學界的重視,也日益受到臨床醫學領域的青睞。通過檢測藥物、基因或蛋白對細胞凋亡及凋亡調控基因的影響,在腫瘤防治、老年癡呆、艾滋病、自身免疫病,心肌梗塞等研究上都發揮著積極的作用。

3、流式鑒定細胞表面抗體
實驗原理
基本原理就是用熒光標記的單克隆抗體來識別細胞表面的抗原(也就是所謂的表面標記),然后通過流式細胞儀來檢驗表面抗原的多少和種類(也就是熒光強度,代表了抗體結合的種類和數量)來鑒定細胞是哪類
 
應用
細胞鑒定分類等,檢測陽性表達細胞的比例。

實驗流程
1、制備樣品的單細胞懸液
2、標記流式抗體
3、流式上機檢測。

 

4、活性氧(ROS)檢測
實驗原理
活性氧檢測( Reactive Oxygen Species Assay Kit是一種基于熒光染料 DCFH-DA(2,7- Dichlorodi- hydrofluoresceindiacetate)的芡光強度變化,定量檢測細胞內活性氧水平的最常用方法。

 

DCFH-DA本身沒有熒光,可以自由穿過細胞膜。進入細胞內后,可以被細胞內的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不會通透細胞膜,因此探針很容易被積聚在細胞內。細胞內的活性氧能夠氧化無熒光的DCFH生成有芡光的DCF。綠色熒光強度與活性氧的水平成正比。在最大激發波長480nm,最大發射波長525nm處,使用熒光顯微鏡,流式細胞儀或激光共聚焦顯微鏡等檢測熒光信號。 Rosup為活性氧陽性誘導藥物,根據其芡光信號強度,可分析活性氧的真正水平。
檢測
原位裝載探針法:激光共聚焦顯徴鏡直接觀察,或收集細胞后用熒光分光光度計、熒光酶標儀或流式細胞儀檢測。收集細胞后裝載探針:用熒光分光光度計、熒光酶標儀或流式細胞儀檢測,也可以用激光共聚焦顯微鏡直接觀察。

 











4、線粒體膜電位檢測

實驗原理
JC-1是一種碳氰化合物類陽離子芡光染料,可作為檢測線粒體跨膜電位指示劑。JC-1在細胞內以聚合體和單體兩種不同的物理形式存在,分別處于不同的熒光發射峰。當JC-1濃度低或膜電位水平低時,主要以單體形式存在,激發波長為527nm,呈綠色熒光;當丁C-1濃度升高或線粒體膜電位水平較高時,形成聚合物,發出紅色的芡光,激發波長為590nm。當細胞發生凋亡時,線粒體跨膜電位被去極化,JC-1從線粒體內釋放,紅光強度減弱,以單體的形式存在于胞質內發綠色熒光,根椐這特征就可以檢測線粒體膜電位的變化。

實驗流程
1.細胞培養;
2.用適當的方法誘導細胞凋亡,同時設立陰性對照組和陽性對照組,收集細胞;
3.用PBS洗滌細胞三次,收集不多于1×10的細胞;
4.取100pL10× Incubation Buffer/加900L滅菌去離子水稀釋成1× Incubation Buffer,混勻并預熱至37"C;
5.吸取500uL1× Incubation Buffer,加入1uLJC-1,渦旋混勻配成C1工作液
6.取500LJC-1工作液將細胞均勻懸浮,37C,5%C02的培養箱中孵育15~20min
7.室溫離心(200opm,5min)收集細胞,用1× Incubation Buffer洗兩次
8.吸取500uL10× Incubation Bufferp重新懸浮細胞;
9.流式細胞儀檢測,分析。
 
原代細胞分離與鑒定
實驗原理
原代細胞分離:體外將動物某組織,經酶法或機械處理法分離成單細胞,并在合適的培養基中篩選出特定細胞,使得目的細胞得以生存、生長和繁殖,稱為原代細胞分離。
 
服務特點
1.細胞純度高:原代分離得到的目的細胞最高純度可達到95%以上
2.細胞活力強:原代分離的細胞一般不能長久傳代,提供PO-P3代的細胞,活力達80%以上,無污染;
注:部分原代細胞無法傳代,如心肌細胞
3.多種鑒定方式:可根據需求提供流式細胞檢測、免疫細胞化學、 Realtime PCR及蛋白印跡等多種檢測方法。

細胞活力測定服務
 
服務簡介
CCK-8( Cell Counting kit-8)試劑中含有WST-8,可被細胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臢產物(Formazan),生成的甲鰧物的數量與活細胞的數量成正比,可采用酶聯免疫檢測儀在450nm波長處測定其光吸收值,間接反映活細胞數量。
 



免疫熒光檢測
服務簡介
細胞免疫化學與免疫組織化學實驗都是依據抗原抗體反應和化學顯色的原理,采用標記的特異性抗體對組織或細胞內抗原的分布進行原位檢測技術。細胞免疫化學將培養處理后的細胞爬片、固定、破膜、封閉后,加入一抗與抗原蛋白結合,再加入標記有熒光素的二抗與一抗進行反應,最后通過熒光顯徴鏡或者激光共聚焦掃描顯微鏡進行熒光拍攝來顯示細胞中靶蛋白的表達變化和定
 
應用
檢測靶蛋白如內分泌激素、蛋白質、多肽、核酸、神經遞質、受體、細胞因子、細胞表面抗原、腫瘤標志物。
 
細胞遷徙與侵襲服務
服務簡介
細胞遷移是指細胞在接收到內源或外源遷移信號后而產生的移動。細胞遷移是通過胞體形變進行的緩慢的定向移動,涉及細胞覓食、傷口痊愈、胚胎發生、免疫反應、感染和癌癥轉移等生理現象。因此通過對細胞遷移的研究,對阻止癌癥轉移、異體植皮等醫學應用方面具有一定意義。細胞侵襲實驗則是研究腫瘤細胞對基質膜消化后的遷移運動,腫瘤細胞須經血管基底膜穿入深面間質后才能侵襲組織和轉移至遠處。
 
腫瘤細胞侵襲遷移能力的改變通常采用 Transwell/室進行檢測。 Transwel小室是一種膜濾器,也認為是一種有通透性的支架Permeable Supports)。這層膜帯有徴孔,孔徑大小0.1-12.0um,根據不同需要可用不同材料,一般常用的是聚碳酸酯膜。將Transwell/室放入培養板中,小室內稱上室,培養板內稱下室,上室內盛裝上層培養液,下室內盛裝下層培養液,上下層培養液以聚碳酸酯膜相隔。我們將細胞種在上室內,由于聚碳酸酯膜有通透性,下層培養液中的成分可用影像到上室內的細胞,從而可以研究下層培養液中的成分對細胞生長、運動等的影響。
服務優勢
1、根據上室和下室的不同處理, transwell r可用于研究共培養、細胞趨化、細胞遷移和侵襲等;
2、不同孔徑的膜可供選擇,滿足不同的實驗需求;3、統計學分析,定量分析結果更可靠。
 
應用
應用包括細胞遷移、趨化(趨化因子對細胞的定向誘導),侵襲(癌細胞侵襲上指腫瘤細胞向局部侵犯或遠處轉移,共培養(同一培養體系里,兩種細胞非接觸性培養)。細胞遷移侵襲上涉及多個步驟、高度完整的過程,在癌癥轉移、動脈粥樣硬化和關節炎等疾病惡化中起重要作用。

細胞克隆形成實驗
服務簡介
細胞克隆形成率即細胞接種存活率,表示接種細胞后貼壁的細胞成活并形成克隆的數量。貼壁后的細胞不一定每個都能增殖和形成克隆,而形成克隆的細胞必為貼壁和有增殖活力的細胞??寺⌒纬陕史从臣毎后w依賴性和增殖能力兩個重要性狀。

應用
如要觀察外源基因表達后較短時間內就能檢測的細胞功能,可使用瞬時轉染/感染。即在轉染后24至96小時內收獲細胞;如需要長期觀察外源基因表達的作用,進行長期藥理學研究、基因治療研究、遺傳調控機制研究或需要進行大規模蛋白合成則需要構建穩轉株

實驗流程
1.取對數生長期的各組細胞,分別用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成單個細胞,并把細胞懸浮在10%胎牛血清的DMEM培養液中備用。
 
2.將細胞懸液作梯度倍數稀釋,每組細胞分別別以每50、100、200個細胞的梯度密度分別接種含10mL37C預溫培養液的皿中并輕輕轉動,使細胞分散均勻。置37C5%C02及飽和濕度的細胞培養箱中培養2~3周。
 
3.經常觀察,當培養皿中出現肉眼可見的克隆時,終止培養。棄去上清液,用PBS小心浸洗2次。加4%6多聚甲醛固定細胞5mL固定15分鐘。然后去固定液,加適量 GIMSA應用染色液染10~30分鐘,然后用流水緩慢洗去染色液,空氣干燥。
 
4.將平皿倒置并疊加一張帶網格的透明膠片,用肉眼直接計數克隆,或在顯徴鏡(低倍鏡)計數大于10個細胞的克隆數。最后計算克隆形成率??寺⌒纬陕?(克隆數/接種細胞數)×100%

細胞黏附實驗
服務簡介
細胞黏附性是維持組織結構穩定的基本條件,也是細胞運動和發揮功能的調節因素,并且對細胞的增殖、分化有重要影響。通??煞譃閮深?,即細胞與細胞黏附和細胞與基質黏附。機體內許多細胞,如上皮細胞,需要牢固地定在某處發揮功能;另一些細胞,如白細胞,活躍運動,就需要不斷調節細胞黏附。細胞黏附性的改變在腫瘤轉移過程中也發揮著重要作用。惡性腫瘤具有從原發瘤分離及在體內擴散的能力,提示這些細胞在相互識別及黏附機制方面發生了改變。

血管形成實驗

服務簡介
在原有的毛細血管和(或)微靜脈基礎上通過血管內皮細胞的遷移和增殖,從已存在的血管處以芽生或非芽生(套迭)形式形成新的、以毛細血管為主的血管系統過程稱之為血管生成,通過體外模擬血管生成的過程對研究血管形成機制、發現促進或抑制血管生成藥物十分重要。

穩轉細胞株篩選
服務簡介
在基因功能的研究中,將目的基因有效導入靶細胞,是功能研究的前提條件之一。根據不同的實驗需求可以選擇瞬時轉染/感染和穩轉細胞株構建。
 
瞬時轉染/感染的特點:外源DNA不整合到宿主的染色體中,一個宿主細胞中可以存在多個拷貝數,產生短時間內的高水平的表達(只能持續幾天);外源基因的表達水平不存在整合位點的問題,不會受到周圍染色體元件的影響;瞬時轉染所需的人力和時間穩轉少,但DNA攝入效率和表達水平在不同實驗中差異較大,因此表達不長久也不穩定。
 
穩轉細胞株的特點:經合適的藥物濃度進行藥物篩選后,可得到外源DNA整合到宿主染色體的細胞,這些細胞可以長時間表達外源目的基因,穩定表達細胞株彌補了瞬時感染(或轉染)實驗中外源基因表達時間短的缺陷,便于長期觀察。穩轉細胞的篩選需根據不同基因載體中所含有的抗性標志選用相應的藥物,常用的抗性篩選有嘌呤霉素( puromycin)、潮霉素(hygromycin)、新霉素( neomycin)、滅稻瘟素( Blasticidin)等。若實驗需求構建穩轉細胞株,我們建議通過慢病毒感染細胞進行藥物篩選的方法,此方法較質粒轉染可以更加有效的將外源基因整合入基因組,且整合位點處于轉錄相對活躍的區域,從而獲得更加高效表達外源基因的穩轉株細胞。
應用
如要觀察外源基因表達后較短時間內就能檢測的細胞功能,可使用瞬時轉染/感染。即在轉染后24至96小時內收獲細胞;如需要長期觀察外源基因表達的作用,進行長期藥理學研究、基因治療研究、遺傳調控機制硏究或需要進行大規模蛋白合成則需要構建穩轉株。

細胞水平實驗                                          細胞水平實驗                                                       細胞水平實驗    

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