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分子水平實驗
分子水平實驗
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分子水平實驗

產品報價:詢價

更新時間:2020/7/13 11:41:11

地:廣東

牌:廣州競遠

號:Y-L14

廠商性質: 服務型,

公司名稱: 廣州競遠生物科技有限公司

產品關鍵詞: 雙熒光素酶報告基因檢測   實時熒光定量qPCR   分子水平實驗   甲基化檢測   病毒包裝  

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向遠 : (18028560893) (020-84131654)

(聯系我時,請說明是在來寶網上看到的,謝謝?。?/b>


核酸提取
服務簡介
高質量DNA和RNA是基因獲取的前提條件,依托高品質的各種 DNA/RNA提取試劑盒,涵蓋了動植物組織、血液、細菌、真菌及包括石蠟、淤泥、水樣等特殊樣品,可以為客戶提供高質量的DNA/RNA樣品,滿足客戶普通PCR、QPCR、文庫構建、基因調取、分子標記、基因雜交等各種科研需求。

主要流程
1.樣本裂解提取
2.純化電泳檢測
3.實驗結果圖片掃描

客戶提供
提供樣品
菌樣:飽和濃度樣品不少于1ml,其它菌樣不少106個菌;
土壤淤泥樣:不少于100g樣品;
血液樣:全血不少于300ul;
動物組織:不少于200mg;
植物根莖葉等組織:不少于500mg

最終交付
交付成品
DNA或RNA樣品
交付報告
提取的質量報告(包括電泳圖、濃度、質量檢測等數據)。

熒光定量PCR技術服務
服務簡介
實時熒光定量PCR技術(Real- ime Quantitative PCR,qPCR)是指在PCR反應體系中加入可與DNA產物特異性結合的熒光基團(包括熒光染料或熒光標記的特異性探針),對PCR產物進行標記跟蹤,隨著PCR反應的進行,反應產物不斷累積,熒光信號強度也等比例增加。每經過一個循環,收集一次熒光強度信號,這樣即可通過熒光信號強度的變化實時監測整個PCR過程中產物量的變化,并結合相應軟件對產物進行分析,可以得到熒光擴増曲線,從而計算待測樣品中目的基因初始模版的量,常用于分析目的基因的表達水平的變化。廣州競遠生物科技有限公司,可根據實驗目的,設計實驗方案(相對定量或絕對定量; SYBR Green I或 Taqman探針方法),用完全按照符合國際標準(MIQE)的熒光定量PCR(qPCR)試劑完成實驗,提供符合文章發表的客觀事實實驗報告和原始數據 
SYBR Green熒光染料法:適用于任何DNA,無需設計探針,采取雙標準曲線法,實驗周期短,結果重復性好,靈敏度高。
Taqman光探針法:經驗豐富的實驗技術人員設計探針,對目標基因有高特異性,實驗重復性好,相對于 SYBR Green?法,靈敏度更高。
熒光定量PCR服務流程
1、根據基因序列設計特異性的引物或熒光探針
2、提取樣品DNA/RNA、電泳、反轉錄
3、 Realtime PCR(熒光定量PCR),進行擴增曲線、溶解曲線、表達量差異分析等實驗
4、實驗完成后,提供完整的實驗報告(含軟件分析結果)及引物等實驗材料
 
樣品要求
細胞>1×106個;組織>50mg;細菌濕重>50mg
1請提供新鮮材料或直接提供已純化的DNA/RNA,確??偭浚?g樣品。如果目的基因表達量較低時,應盡量提供更高濃度的總RNA或DNA
 
2.請提供已知的全長基因序列( Genebank Accession Number、 Gene ID)
 
3請提供盡可能詳細的背景資料:生物物種信息( Human Mouse、Rat等)、DNA/RNA來源、豐度等
4.客戶可以提供引物,沒有引物的情況下,本公司幫助設計合成。
 
熒光定量PCR(qPCR)報告內容
總RNA(或DNA)濃度,電泳圖片,擴増曲線,熔解曲線,Ct值以及數據統計分析。

病毒包裝
1.慢病毒包裝
服務簡介
慢病毒( Lentiviruses)屬于逆轉錄病毒科。慢病毒( Lentivirus)載體是以HIV-1(人類免疫缺陷1型病毒)為基礎發展起來的基因治療載體。具有感染譜廣泛、可以有效感染分裂期和靜止期細胞、長期穩定表達外源基因等優點,因此成為導入外源基因的有力工具?,F在慢病毒系統已經被廣泛應用到各種細胞系的基因過表達、RNA干擾、 MICRORNA研究以及活體動物實驗中。我公司提供慢病毒載體構建、RNAi( SHRNA)、 MIRNA、過表達和干抗慢病毒包裝以及基于慢病毒技術的穩定細胞系構建服務。靈敏度更高。
 
整體實驗流程
1.構建質粒
a.慢病毒過表達質粒載體的構建設計上下游特異性擴増引物,同時引入酶切位點,采用PCR技術(采用高保真KOD酶,3K內突變率為09%)從模板中(cDNA質?;蛘呶膸?調取目的基因CDS區( coding sequence)連入T載體。將CDS區從T載體上切下,裝入慢病毒過表達質粒載體。
b.慢病毒干擾質粒載體的構建合成 SIRNA對應的DNA須環結構,退火后連入慢病毒干擾質粒載體。
c. MIRNA載體構建從 genomic中調取基因相應的Mir前體,并在調取引物中引入酶切位點。2.共轉293T細胞
3.收集病毒
4.病毒轉化、濃縮
5.病毒感染活性鑒定
6.成果交付
 
質量控制
我們會對每一批病毒都進行滴度檢測,嚴格控制質量,讓你百分百放心。針對用攜帶熒光報告基因的轉移質粒生產的病毒,我們會先用熒光法檢測病毒的轉導率,如能達到使用要求,再進一步采用qPCR法檢測病毒滴度。

2.腺病毒包裝
實驗原理
腺病毒( Adenovirus)是一種沒有包膜的直徑為70-90nm的病毒顆粒,為線狀雙鏈DNA分子,約含35000bp,兩端各有長約100bp的反向重復序列
 
腺病毒為5型血清型腺病毒,缺失了腺病毒的早期表達基因序列E1區和E3區。E1是腺病毒復制所必須的,E1的缺失使其不能自身復制,只能依靠包裝細胞如HEK293細胞提供的反式互補進行復制擴增,以此保證腺病毒的安全性。E3基因表達的蛋白能對抗宿主的抗病毒防御系統,E3區的去除能減少宿主的體內免疫反應。
 
腺病毒包裝采用的是最新的 Admax:系統,通過Cre-loxp重組酶,使共轉染到HEK293細胞中的腺病毒載體穿梭質粒和骨架質粒(腺病毒基因組質粒)在重組酶的作用下產生重組腺病毒,獲得的病毒滴度更高,其病毒滴度可以達到1×10^12 pfu/ml
 
腺病毒載體有CMV、mCMV、CAG、PGK、UbC、EF1a、等多種啟動子可供選擇;而且還有EGFP、 ZSGRE、Tomato、 mcherry、EYF等多種熒光標記蛋白可供選擇。
3.腺病毒相關病毒包裝
實驗原理
腺相關病毒( adeno- associated virus,AAV),也稱腺伴隨病毒,屬于微小病毒科依賴病毒屬,是目前發現的一類結構最簡單的單鏈DNA缺陷型病毒,需要輔助病毒(通常為腺病毒)參與復制。
腺相關病毒血清型種類齊全,可提供AAV1、AAV2、AAV3、AV4、AV5、AV6、AAV7、AV8、AAV9、AAV-D共10種血清型,而且還可以包裝雙鏈AV( SCAAV)。
巴菲爾生物的腺相關病毒載體有CMV、mC.MV、CAG、PGK、RK1、FF1a、GFAP等多種啟動子可供選擇;而且還有EGFP、 Zsgreen、 tdtomato、 mcherry、EYFP2等多種熒光標記蛋白可供選擇;同時可以提供誘導型AAV病毒的包裝,如Tet-On系統等。

雙熒光素酶報告基因檢測
實驗原理
通過將感興趣的目的基因轉錄調控元件構建到帶熒光素酶( firefly luciferase)的表達載體,如pGL3,構建成報告基因質粒,使這段DNA序列調控 luciferase的轉錄。然后將報告基因質粒轉染細胞,適當刺激或處理后裂解細胞,并加入底物熒光素后(luciferin), luciferase可以催化熒光素發出熒光,從而可以通過測量熒光值的高低判斷刺激前后或不同刺激對感興趣的調控元件的影響。為避免由于質粒轉染細胞時效率的差異帶來的誤差,可以同時轉入 Renilla?芡光酶素的報告基因質粒作為內參,即雙熒光報告系統。該實驗可以用于研究轉錄因子對promoter或 enhancer序列的調控,也可以用于研究受體活性,細胞內信號通路,或者 MICRORNA對基因表達的調控。
 
應用
1.澘在啟動子/啟動子核心區域檢測
2.澘在增強子/抑制子等調控子核心元件檢測
3.啟動子區可能的轉錄因子結合位點檢測
4.啟動子/增強子與轉錄因子的相互作用;
5.病毒/細胞相互作用;
6.藥物等化學誘導因素對啟動子活性的調節(抑制或增強);
7.射線等物理誘導因素對啟動子活性的調節(抑制或増強)
8. MICRORNA靶基因驗證。

染色質免疫共沉淀相關服務
 
實驗原理
染色質免疫共沉淀( Chromatin Immunoprecipitation,ChIP技術主要是用于研究DNA和蛋白質的相互作用。染色質主要是由組蛋白和纏繞在上面的DNA組成。在染色質上還結合了許多轉錄因子、染色質重塑相關蛋白和非編碼RNA。染色質上結合的蛋白或者組蛋白上不同的共價修飾可以通過改變染色質的結構,或者招募相關的因子來調控基因的表達。通過ChIP技術,我們可以研究不同的組蛋白修飾、轉錄因子以及染色質上結合的一些其他蛋白,在基因組上的分布。
 
ChIP實驗的主要原理是,當DNA和蛋白結合或者距離很近時,通過甲醛固定交聯,在DNA和蛋白分子之間形成共價鍵。將染色質通過超聲波破碎或者徴球菌核酸酶處理,打斷成小片段,然后通過特異性的ChIP級別抗體,富集目的蛋白。經過逆交聯處理之后,消化水解目的蛋白,回收得到目的DNA,從而得到與目的蛋白相互作用的DNA信息。
 
整體實驗流程
1.細胞交聯
2.抗體有效性檢測
3.免疫共沉淀
4.建庫測序/PCR驗證

樣本要求
動物細胞:3x107~5x107,1%的甲醛交聯,干冰運輸。
動物組織:0.5-2g,對于較大的組織,先切成1-5mm的組織塊,干冰運輸。
植物組織:5-20g,干冰運輸。
抗體需要提前驗證滿足ChIP或者IP實驗要求。
 
生物信息分析內容
標準信息分析
1.去接頭污染,去低質量 reads和測序質量評估
2.ChIP測序序列與參考基因組序列的比對
3.ChIP測序唯- reads在全基因組的分布
4.Peak鑒定及基因原件分析
5.Peak相關基因篩選與GO功能聚類分析、 Pathway分析
高級信息分析
可根據客戶的需求,定制高級信息分析內容
 
交付結果
1.測序原始數據。
2.實驗結果類文件。
3.分析析報告以及分析結果文件。
4.部分發表文章用的方法描述性書寫(定制性)。

甲基化檢測服務
實驗原理
DNA甲基化是最早發現的基因表觀修飾方式之一,真核生物中的甲基化僅發生于胞嘧啶,即在DNA甲基化轉移酶( DNMTS)的作用下使CpG二核苷酸5~端的胞喀啶轉變為5”-甲基胞喀啶。DNA甲基化通常抑制基因表達,去甲基化則誘導了基因的重新活化和表達。這種DNA修飾方式在不改變基因序列前提下實現對基因表達的調控。
注:M:甲基化引物PCR擴増;U:非甲基化引物PCR擴増。SW1353細胞在藥物處理后從完全甲基化轉變為完全非甲基化,OUMS-27細胞在5-Aza-dC處理后從部分甲基化部分非甲基化狀態轉變為完全非甲基化。
Northern或 Southern Blot檢測服務
實驗原理
Southern雜交是進行基因組DNA特定序列定位的方法,由 Southern于1975年創建,稱為 Southerne印跡技術。其原理為利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段,將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段轉移至尼龍膜或其他固相支持物上,經干烤或者紫外線照射固定,再與相對應結構的DG標記探針進行雜交,用放射自顯影或酶反應顯色,從而檢測特定DNA分子的含量。
Northerne印跡雜交( Northern blot)是一種將RNA從瓊脂糖凝膠中轉印到硝酸纖維素膜上的方法,主要利用堿基配對原則,利用特性的DNA探針與其雜交,經過顯影技術分析RNA的最和大小。RNA印跡技術正好與DNA相對應,故被稱為 Northern印跡雜交,與此原理相似的蛋白質印跡技術則被稱為 Western blot

實驗流程
a) Northern Blot
1.完整mRNA的分離
2.根據RNA的大小通過瓊脂糖凝膠電泳對RNA進行分離
3.將RNA轉移到固相支持物上,在轉移的過程中,要保持RNA在凝膠中的相對分布
4.將RNA固定到支持物上
5.固相RNA與探針分子雜交
6.除去非特異結合到固相支持物上的探針分子
7.對特異結合的探針分子的圖像進行檢測、捕獲和分析

b)Southern Blot
1、制備待測DNA2、DNA限制酶消化
3、瓊脂糖凝膠電泳分離待測DNA樣品
4、電泳凝膠預處理
5、轉膜
6、探針標記
7、預雜交
8、 Southern雜交
9、洗膜
10、放射性自顯影檢測
11、實驗結果分析及報告
樣本要求
1.新鮮組織:
用解剖刀等迅速切成小碎塊約30-100mg,放入20mL離心營中開蓋液氮速東15min.80度保存,干冰運輸。每個northern blot泳道提供2-3管樣品。注:解剖刀處理組織的時間盡量控制在1min以內。液氮速凍時必須開蓋以防炸裂。
2細胞樣品:
縣浮細胞1000-1500rpm,5min,常溫離心收集細胞。貼壁細胞用胰蛋白酶消化后吹丁收集,PBS洗滌細胞,去除多余培養基和胰蛋白酶。開蓋液氮速凍15min,-80度保存干冰運輸,一般情況下,細胞培養的6孔板每孔細胞數量約為0.5-2*106個。每個離心管中的細胞數量控制在5*106個左右1每個泳道提供2-3管樣品。
3.RNA樣品:
RNA溶液(DEPC- treated water溶解):-80度保存,干冰運輸。
RNA沉淀:保存在75%乙醇(無核酶)中的RNA沉淀.2~8度保存1周,20度保存一年;加冰塊低溫運輸。質量檢測:取1-2L的RNA進行球脂糖凝膠電泳,5s,18s,28清晰可見,28的亮度應為18的1.5~2倍;無基因給污染,純度、濃度檢測:0D260/280=1.9-2.2。濃度300 ng/ul.
4.DNA樣品(雙蒸水溶解)
2-8度短期保存,-20度長期保存;加冰塊低溫運輸。質星檢測:取1-2ul的DNA進行瓊脂糖凝膠電泳無蛋白質和RNA等物質污染無降解彌散,條帶清晰。
純度、濃度檢測:OD260/280=1.8~2.0,濃度>100ng/uL.
5.注意事項:
請嚴格按照樣品提供原則準備樣品.由于未按照要求提供樣品.而造成的實驗結果不理想我公司不承擔相應責任,請知悉。我們不接受有致病性的樣品,請知悉。

分子水平實驗                                                  分子水平實驗                                                   分子水平實驗  

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